冷凍組織研磨機(jī)常常在實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)，可用范圍廣，耐用程度高，這次研磨主角是-小鼠內(nèi)臟組織，在這里測(cè)博用了兩種方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，下面把詳細(xì)的操作步驟記錄并分享給更多實(shí)驗(yàn)員。

　　冷凍組織研磨機(jī)研磨提取小鼠內(nèi)臟組織方法一：加裂解液直接勻漿

　　1、取適量組織裝入離心管，組織盡量剪碎成小塊；

　　2、在離心管中加入氧化鋯珠數(shù)顆（一次性使用）；

　　3、先加入試劑（不建議加入太多，液體體積過(guò)大影響勻漿效果），蓋好管蓋，裝入組織研磨機(jī)適配器中。

　　4、組織研磨機(jī)研磨參數(shù)設(shè)置為一定轉(zhuǎn)速，研磨時(shí)間為2~5min

　　注意：不同組織研磨時(shí)間不同，腦1min，肝臟、脾臟和腎臟2min、肺臟比較難研磨需3~5min，可能更長(zhǎng)，中間應(yīng)停頓1~2次防止溫度過(guò)高，研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱預(yù)冷；

　　5、再加入適量試劑至總體積后按照說(shuō)明書(shū)上進(jìn)行后續(xù)操作即可；

　　方法二：先勻漿，再取一定量液體加裂解液進(jìn)行核酸抽提，適用提取小鼠組織中的病毒的核酸

　　1、取適量組織裝入離心管，組織盡量剪碎成小塊，樣品量較多時(shí)使用大離心管；

　　2、在離心管中加入氧化鋯珠數(shù)顆，使用大離心管時(shí)，可以將氧化鋯珠數(shù)量增加；

　　3、加入適量的滅菌PBS或生理鹽水，總體積為離心管單管體積的1/3~1/2為好，蓋好管蓋，裝入測(cè)博組織研磨機(jī)適配器中，安裝上機(jī)（研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱預(yù)冷）。

　　4、組織研磨機(jī)參數(shù)設(shè)置為一定轉(zhuǎn)速，研磨時(shí)間為1~5min（不同組織研磨時(shí)間不同，腦1min，肝臟、脾臟和腎臟2min、肺臟比較難研磨需3~5min，可能更長(zhǎng)，中間應(yīng)停頓1~2次防止溫度過(guò)高），若研磨不充分，可以繼續(xù)研磨到充分為止；

　　5、一定溫度、轉(zhuǎn)速，離心數(shù)分鐘；

　　6、取上清液按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行后續(xù)提取步驟。方法1中，我們之前試過(guò)一齊加1ml的試劑，可能是體積過(guò)大，反而勻漿效果不好，所以就改成先加一部分裂解先勻漿，然后再補(bǔ)齊1ml體積進(jìn)行。

　　使用后要記得對(duì)研磨機(jī)進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)操作哦：

　　1、妥當(dāng)?shù)拇鎯?chǔ)：如較長(zhǎng)時(shí)間不使用研磨機(jī)器和研磨夾具，應(yīng)將研磨夾具浸在氯乙烷里用超聲波清洗，然后涂上保護(hù)油保存在專(zhuān)用工具箱里。

　　2、清水洗凈：每次研磨完成后，或者要停止研磨一段時(shí)間，都應(yīng)將機(jī)器上所有的研磨液，用水徹底清洗干凈，否則，殘留的研磨液和研磨水將會(huì)變干、變硬或滲到研磨機(jī)內(nèi)對(duì)機(jī)器造成損壞。

　　3、替換潤(rùn)滑油：觀(guān)察研磨底盤(pán)下面的油脂，定期更換與補(bǔ)充新油脂，保護(hù)研磨底盤(pán)以及研磨底盤(pán)的支撐面，不要受異物的污染、撞擊，研磨機(jī)正常工作時(shí)15-20天應(yīng)對(duì)研磨底盤(pán)潤(rùn)滑油進(jìn)行更換。